B27無血清培養(yǎng)基的基本配方:
基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細胞在體外培養(yǎng)時,多數(shù)呈貼壁生長或兼性貼壁生長;而當其在無血清、無蛋白培養(yǎng)基中生長時,由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白,細胞往往以懸浮形式生長。
B27無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點:
1)避免血清不同批次間的質(zhì)量差異,提高細胞培養(yǎng)實驗結(jié)果的一致性。
2)避免血清對細胞的毒性作用和血清源性污染。
3)避免血清組分對實驗研究的影響。
4)有利于體外培養(yǎng)細胞的分化。
5)可提高目的蛋白的表達量并使產(chǎn)品易于分離純化。
6)組分穩(wěn)定,可大量生產(chǎn)。
7)不含有絲分裂原抑制劑,可以促進細胞增殖。
B27無血清培養(yǎng)基的使用方法:
血清仍是動物細胞培養(yǎng)中基本的的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或者細胞生長狀況不良時,常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進行培養(yǎng),待細胞生長旺盛以后,再換成無血清培養(yǎng)液。細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應過程,一般要逐步降低血清濃度,從10%減少到5%,3%,1%,直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細胞形態(tài)是否發(fā)生變化,是否有部分細胞死亡,存活細胞是否還保持原有的功能和生物學特性等。在實驗后這些細胞一般不再繼續(xù)保留,很少有細胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。
細胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前,要留有種子細胞,種子細胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中,以保證細胞的特性不發(fā)生變化。