MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒
試劑盒組成 | 500T |
MTT溶液 | 5ml |
DMSO | 60ml |
MTT檢測試劑盒采用MTT經典的方法。其實老師可能自己配制,而買現成的,主要是圖個省事。
MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。MTT可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成結晶狀的深紫色產物formazan。在特定溶劑存在的情況下,可以被*溶解。然后通過酶標儀可以測定570nm波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快,則吸光度越高;細胞毒性越大,則吸光度越低。
使用說明:
1. MTT溶液拿出解凍。DMSO常溫存放,如果室溫過低(DMSO在20度以下會結冰),可放37度預熱解凍。
2. 通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。按照實驗需要,進行培養(yǎng)并給予0-10微升特定的藥物刺激。
3. 每孔加入10微升MTT溶液,在細胞培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育4小時。
4. 每孔加入100微升DMSO,在細胞培養(yǎng)箱內再繼續(xù)孵育。直至全部溶解。通常37℃孵育4小時左右,紫色結晶會全部溶解。如果紫色結晶較小較少,溶解的時間會短一些。如果紫色結晶較大較多,溶解的時間會長一些。
5. 在570nm測定吸光度。如無570nm濾光片,可以使用560-600nm的濾光片。
有些實驗室條件不足,沒有酶標儀,聽說用分光光度計來測,理論上沒什么不可以。但肯定得是用微孔比色皿,速度快一點。
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