SABC雙標(biāo)試劑盒(免疫組化試劑盒)
簡(jiǎn)要描述:貨 號(hào):A0015名 稱:SABC雙標(biāo)試劑盒(免疫組化試劑盒)規(guī) 格:100T價(jià) 格:960.00
產(chǎn)品型號(hào):
所屬分類(lèi):其他自產(chǎn)即用試劑
更新時(shí)間:2024-01-07
廠商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
A0015 | SABC(小鼠IgG)- FITC(POD) kit | 100T | 960 |
A0016 | SABC(兔IgG)- FITC(POD) kit | 100T | 960 |
A0017 | SABC(山羊IgG)- FITC(POD) kit | 100T | 960 |
SABC雙標(biāo)試劑盒說(shuō)明書(shū)
試劑盒組成:
1, 封閉液:10ml,5%BSA
2, 生物素化二抗:濃縮液100ul。
3, SABC-FITC:濃縮液100ul。
4, SABC-POD:濃縮液100ul。
5, 稀釋液:30ml。
6, 顯色液:20×DAB顯色液A,20×DAB顯色液B
7, 抗熒光衰減封片劑
試劑盒簡(jiǎn)介:
本試劑盒適合于一抗為小鼠/兔IgG/山羊的免疫組化實(shí)驗(yàn). DAB及FITC顯色。
SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的,用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),同親和素一樣,對(duì)生物素有*的親和力,親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)(IP=10),經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低,基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大約可形成一百個(gè)左右的過(guò)氧化物酶和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的酶將保證SABC具有很高的敏感性。
自備試劑:
1.粘片劑多聚賴氨酸。
2. 0.01 M PBS(pH7.2-7.4)
3. 0.01M檸檬酸鈉緩沖液
4、抗熒光衰減封片劑
實(shí)驗(yàn)步驟:
以石蠟切片熱修復(fù)為例
1. 切片常規(guī)脫蠟至水。3%H2O2室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶(如果FITC,剛可省掉此步)。蒸餾水洗3次。
2.熱修復(fù)抗原:將切片浸入0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10分鐘后,反復(fù)1-2次。冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1-2次。
3.滴加5%BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 不洗。
4.用稀釋液將一抗(如兔抗IL-10)按一定比例稀釋(稀釋后的一抗4℃可保存一周),也可另行購(gòu)買(mǎi)抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗,37 ℃ 1小時(shí)左右或20℃時(shí)2小時(shí)左右。也可4℃過(guò)ye。PBS(pH7.2-7.4)洗2分鐘×3次。(一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō),陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí),可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間;背景過(guò)高時(shí),可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。)
5.根據(jù)使用量,用稀釋液將生物素化二抗?jié)饪s液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul生物素化羊抗兔IgG濃縮液,混勻即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加生物素化羊抗兔IgG工作液,20-37℃ 30分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗2分鐘×3次。
如果想用熒光觀察,請(qǐng)接下面步驟,如果想用DAB顯色,請(qǐng)?zhí)^(guò)6-7。
6.根據(jù)使用量,用稀釋液將SABC-FITC濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-FITC濃縮液,混勻即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃,30分鐘(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗5分鐘×4次。
7.滴加抗熒光衰減封片劑封片。熒光顯微鏡觀察。
如果想用DAB顯色,請(qǐng)接8。
8.根據(jù)使用量,用稀釋液將SABC-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-POD濃縮液,混勻即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃,30分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗5分鐘×4次。
9.DAB顯色:根據(jù)用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50ul 20×DAB顯色液A,加入50ul 20×DAB顯色液B ?;靹蚝蠹又燎衅?。室溫顯色, 鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,一般在5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。
10.蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。
對(duì)于細(xì)胞片,常規(guī)固定后,PBS漂洗兩次,再用0.5%Txiton X-100室溫20分鐘,PBS漂洗兩次,3%H2O2(如果FITC,剛可省掉此步)處理15分鐘;PBS漂洗兩次,下接上面第4步。
對(duì)于冰凍切片,固定后,可用PBS漂洗兩次,再接上面第二步。
注意事項(xiàng):如果染色背景過(guò)高,在SABC反應(yīng)之后,DAB顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗滌切片4次,PBS洗2次,然后DAB顯色。
因?yàn)槊庖呓M化指標(biāo)眾多,標(biāo)本不一,此步驟僅作參考。
注意事項(xiàng):如果染色背景過(guò)高,在SABC反應(yīng)之后,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗滌切片4次,PBS洗2次,然后封片觀察。
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