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SABC(山羊IgG)-POD免疫組化試劑盒

SABC(山羊IgG)-POD免疫組化試劑盒

簡(jiǎn)要描述:貨  號(hào):A0170
名  稱:SABC(山羊IgG)-POD免疫組化試劑盒
規(guī)  格:100T
價(jià)  格:720.00

產(chǎn)品型號(hào):

所屬分類:其他自產(chǎn)即用試劑

更新時(shí)間:2024-01-07

廠商性質(zhì):經(jīng)銷商

詳情介紹

SABC(山羊IgG)-POD說(shuō)明書

 

貨號(hào):SA0031

 試劑盒組成:

1,  封閉液(5%BSA):10ml。

2,  3% H2O2:10ml。

3,  Bio-兔抗山羊IgG:濃縮液100ul。

4,  SABC-POD:濃縮液100ul。

5,  稀釋液:30ml。

6,  顯色液(1ml+1ml):20×DAB顯色液A,20×DAB顯色液B。

試劑盒保存:如果一段時(shí)間不使用,請(qǐng)將所有試劑存放于-20℃,如經(jīng)常使用,可將封閉液,封閉液和20×DAB顯色液B存放于2-8℃以方便使用

試劑盒簡(jiǎn)介:

本試劑盒適合于一抗為山羊IgG的免疫組化實(shí)驗(yàn). DAB顯色。

SABC是專為免疫組化和其他免疫檢測(cè)而設(shè)計(jì)的,用以顯示組織和細(xì)胞中抗原分布。鏈霉親和素(StreptAvidin)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),同親和素一樣,對(duì)生物素有*的親和力,親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)(IP=10),經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低,基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex。SABC大約可形成一百個(gè)左右的過(guò)氧化物酶和五十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。大量的酶將保證SABC具有很高的敏感性。

自備試劑:

1.粘片劑多聚賴氨酸。

2. 0.01 M PBS(pH7.2-7.4)

3. 0.01M檸檬酸鈉緩沖液

4、蘇木素

 實(shí)驗(yàn)步驟: 微量試劑請(qǐng)離心后使用

以石蠟切片為例

1. 切片常規(guī)脫蠟至水(三次二甲苯,三次乙醇)。

2. 3%H2O2室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。

3.可選步聚:a、熱修復(fù)抗原,將切片浸入0.01M 檸檬酸鈉緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10分鐘后,反復(fù)1-2次。冷卻后PBS(pH7.2-7.4)洗滌1-2次。b、酶消化滴加消化液,3710分鐘, PBS(pH7.2-7.6)洗滌2-3次。c、跳過(guò)此步,直接進(jìn)入下一步。

4. 滴加5%BSA封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體, 不洗。

5.用稀釋液將一抗(如山羊抗IL-10)按一定比例稀釋(稀釋后的一抗4℃可保存一周),也可另行購(gòu)買抗體稀釋液。滴加稀釋的一抗,37 ℃ 1小時(shí)左右或20℃時(shí)2小時(shí)左右。也可4℃過(guò)ye。PBS(pH7.2-7.4)洗2分鐘×3次。(一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō),陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí),可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間;背景過(guò)高時(shí),可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。)

6.根據(jù)使用量,用稀釋液將Bio-兔抗山羊IgG濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul Bio-羊抗山羊IgG濃縮液,混勻即成工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加Bio-羊抗山羊IgG工作液,20-37℃ 30分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗2分鐘×3次。

7.根據(jù)使用量,用稀釋液將SABC-POD濃縮液按1:100稀釋成工作液(1ml稀釋液加入10ul SABC-POD濃縮液,混勻即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃,30分鐘。PBS(pH7.2-7.4)洗5分鐘×4次。

8.DAB顯色:根據(jù)用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50ul 20×DAB顯色液A,加入50ul 20×DAB顯色液B ?;靹蚝蠹又燎衅?。室溫顯色, 鏡下控制反應(yīng)時(shí)間,一般在5-30分鐘之間。蒸餾水洗滌終止反應(yīng)。

9.蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。

 

對(duì)于細(xì)胞片,常規(guī)固定后,PBS漂洗兩次,再用0.5%Txiton X-100室溫20分鐘,PBS漂洗兩次,3%H2O2處理15分鐘;PBS漂洗兩次,下接上面第4步。

 

對(duì)于冰凍切片,固定后,可用PBS漂洗兩次,再接上面第二步。

 

注意事項(xiàng):如果染色背景過(guò)高,在SABC反應(yīng)之后,DAB顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗滌切片4次,PBS洗2次,然后DAB顯色。

 

 

因?yàn)槊庖呓M化指標(biāo)眾多,標(biāo)本不一,此步驟僅作參考。



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