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Bradford蛋白濃度測定試劑盒

Bradford蛋白濃度測定試劑盒

簡要描述:貨  號(hào):P0120
名  稱:Bradford蛋白濃度測定試劑盒
規(guī)  格:2500微孔
價(jià)  格:150.00

產(chǎn)品型號(hào):

所屬分類:其他自產(chǎn)即用試劑

更新時(shí)間:2024-01-07

廠商性質(zhì):經(jīng)銷商

詳情介紹

Bradford蛋白濃度測定試劑盒

組成

包裝(2500微孔)

保存

5×G250染色液

100ml

2-8℃

PBS稀釋液

30ml

2-8℃

蛋白標(biāo)準(zhǔn)(5mg/ml BSA)

1ml

-20℃

本試劑盒自訂購之日起九個(gè)月內(nèi)有效。本試劑盒用于酶標(biāo)板或者200ul比色皿時(shí)可做2500孔。當(dāng)使用2ml比色皿時(shí)可做250孔,如果是1ml比色皿時(shí)可做500孔。 

Bradford蛋白濃度測定試劑盒產(chǎn)品簡介:

考馬斯亮蘭G-250染料,在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合,使染料的zui大吸收峰的位置(lmax),由465nm變?yōu)?95nm,在一定的濃度范圍內(nèi),測定的吸光度值A(chǔ)595,與蛋白質(zhì)濃度成正比。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。樣品中巰基乙醇的濃度可高達(dá)1M,二硫蘇糖醇的濃度可高達(dá)5mM。但受略高濃度的去垢劑影響。需確保SDS低于0.1%,Triton X-100低于0.1%Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白濃度測定試劑盒。

操作說明:

一,微孔酶標(biāo)儀法

1.        *溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,取10ml,加240ulPBS稀釋至250m,使終濃度為0.2mg/ml。待測蛋白樣品在什么溶液中,標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見,也可以用0.9%NaClPBS稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。

2.        5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻,取1ml  5×G250染色液,加入4ml雙蒸水,混勻成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。

3.        將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中,加PBS稀釋液補(bǔ)足到20微升。

4.        將樣品作適當(dāng)稀釋(多做幾個(gè)梯度,如作2倍、4倍、8倍稀釋),加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時(shí)的誤差,標(biāo)準(zhǔn)線前面的點(diǎn)可能不很準(zhǔn)確,所以盡可能的讓樣品點(diǎn)落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后。

5.        各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液,室溫放置3-5分鐘。

6.        用酶標(biāo)儀測定A595,或560-610nm之間的其它波長的吸光度。

7.        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中的蛋白濃度。

    

二,分光光度計(jì)法

如沒有酶標(biāo)儀,可用分光光度計(jì)在離心管中混勻后加入比色皿中比色。

步驟如下:

1,取八支(或者更多)干凈的10ml離心管,標(biāo)記上號(hào)。

2,100ulBSA,加PBS2.4ml稀釋至終濃度為0.2mg/ml

3,5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻,取10ml  5×G250染色液,加入40ml雙蒸水,混勻成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4,按下表加入試劑(以每孔5ml計(jì),多余的用來潤洗比色皿)

 

 

離心管號(hào)

1

2

3

4

5

6

7(樣品管1

8(樣品管2

9(樣品管3

標(biāo)準(zhǔn)蛋白BSA

0

100ul

200ul

300ul

400ul

500ul

500ul適當(dāng)稀釋的樣品1

500ul適當(dāng)稀釋的樣品2

……

PBS

500ul

400ul

300ul

200ul

100ul

0

0

0

0

1×G250染色液

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

5ml

 

5,反應(yīng)3分鐘后測OD值。為了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,可每間隔2分鐘加一管染色液,每間隔2分鐘測一管OD值。如下表。

 

離心管號(hào)

1

2

3

4

5

6

7

8

……

染色液(分鐘)

0

2

4

6

8

10

12

14

……

OD

3

5

7

9

11

13

15

17

……

現(xiàn)貨供應(yīng)



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