IPTG溶液 50mg/ml BL545A
簡要描述:IPTG溶液 50mg/ml BL545A 現(xiàn)貨產(chǎn)品編號:BL545A 產(chǎn)品規(guī)格:5ml 產(chǎn)品品牌:Biosharp 產(chǎn)品價格:60.00
產(chǎn)品型號:
所屬分類:Biosharp*生物科技
更新時間:2024-01-08
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
IPTG溶液 50mg/ml BL545A 現(xiàn)貨
IPTG/X-Gal 即用型溶液 產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 BL545A IPTG 50 mg/ml 5 ml BL546A X-Gal 20 mg/ml 5 ml 產(chǎn)品簡介: 藍(lán)白斑篩選是重組子篩選的一種方法?,F(xiàn)在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA 的短區(qū)段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調(diào)控序列和前146個氨基酸的編碼信息。在這 個編碼區(qū)中插入了一個多克隆位點(MCS),它并不破壞閱讀框,但可使少數(shù)幾個氨基酸插 入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能,這種載體適用于可編碼β-半乳糖苷酶C端部分序 列的宿主細(xì)胞。因此,宿主和質(zhì)粒編碼的片段雖都沒有酶活性,但它們同時存在時,可形成 具有酶學(xué)活性的蛋白質(zhì)。這樣,lacZ基因在缺少近操縱基因區(qū)段的宿主細(xì)胞與帶有完整近操 縱基因區(qū)段的質(zhì)粒之間實現(xiàn)了互補,稱為α-互補。由α-互補而產(chǎn)生的LacZ +細(xì)菌在誘導(dǎo)劑IPTG 的作用下,在生色底物X-Gal存在時產(chǎn)生藍(lán)色菌落,因而易于識別。然而,當(dāng)外源DNA插入到 質(zhì)粒的多克隆位點后,幾乎不可避免地導(dǎo)致無α-互補能力的氨基端片段,使得帶有重組質(zhì)粒 的細(xì)菌形成白色菌落。這種重組子的篩選,又稱為藍(lán)白斑篩選。如用藍(lán)白斑篩選則經(jīng)連接產(chǎn) 物轉(zhuǎn)化的鈣化菌平板37℃倒置培養(yǎng)12-16hr后,含有插入片段重組質(zhì)粒的細(xì)菌形成白色菌落, 而沒有插入片段的質(zhì)粒細(xì)菌形成藍(lán)色菌落。 配制方法: 50mg/ml IPTG 5 ml:取250 mg IPTG,溶于5 ml無菌水中,過濾除菌后-20℃貯存。 20mg/ml X-Gal 5 ml:取100 mg X-gal,溶于5 ml 二甲基甲酰胺(DMF),棕色瓶中-20℃ 貯存。此試劑無需滅菌。 實驗程序: 1、轉(zhuǎn)化平板的制備: 向鋪好的含有相應(yīng)抗生素的固體瓊脂平板表面加入16 µl的IPTG(50 mg/ml)、40 µl的X-gal (20 mg/ml),使用無菌的彎頭玻璃棒將其均勻的涂開,盡量使溶解X-gal的二甲基甲酰胺揮發(fā) 干凈。 2、轉(zhuǎn)化 (1)取部分連接產(chǎn)物加到50-100 µl感受態(tài)細(xì)胞中(感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)剛從-70℃冰箱取出放 于冰浴上,待剛剛解凍時加入連接產(chǎn)物,連接產(chǎn)物的加入量不超過感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之 一),輕彈混勻,冰浴30分鐘。
(2)將離心管置于精確42℃水浴90秒,取出管后立即置于冰浴中放置2-3分鐘,其間不 要搖動離心管。 (3)向離心管中加入250-500 µl 37℃預(yù)熱的SOC或LB(不含抗生素)培養(yǎng)基,150rpm,37℃ 振蕩培養(yǎng)45分鐘。此步目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。 (4)將離心管中的菌液混勻,吸取100 μl加到含相應(yīng)抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基 上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。待平板表面干燥后,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時。 3、檢測 將得到的白色菌落接種 1-5 ml LB 培養(yǎng)基,37℃搖床振蕩培養(yǎng)整夜,保存菌種后提取質(zhì) 粒,應(yīng)用 PCR 或酶切方法鑒定插入片段是否正確。 保存條件: -20℃保存,至少一年有效。
IPTG溶液 50mg/ml BL545A 現(xiàn)貨
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 | 報價 |
常用試劑以及PH緩沖液 | ||||
BL510A | DEPC水 | 100ml | Biosharp | 40 |
BL514A | 1M Tris-HCl溶液,pH6.8 | 100ml | Biosharp | 50 |
BL515A | 1M Tris-HCl溶液,pH8.8 | 100ml | Biosharp | 50 |
BL516A | 1.5M Tris-HCl溶液,pH8.8 | 100ml | Biosharp | 60 |
BL517A | 10% SDS溶液 | 100ml | Biosharp | 50 |
BL518A | 0.5M EDTA pH8.0 | 500ml | Biosharp | 120 |
BL537A | 1M Tris-HCl,pH7.6 | 100ml | Biosharp | 30 |
BL538A | 1M Tris-HCl,pH8.0 | 100ml | Biosharp | 30 |
BL601A | PBS緩沖液(即用型干粉) | 2L | Biosharp | 10 |
BL604A | 枸櫞酸緩沖液(即用型干粉) | 1L | Biosharp | 10 |
BL531A | TE Buffer | 100ml | Biosharp | 40 |
BL541A | 3M 醋酸鈉 pH5.2 | 100ml | Biosharp | 50 |
BL542A | 5M NaCl | 100ml | Biosharp | 50 |
BL543A | RNaseA 10ml/ml | 1ml | Biosharp | 60 |
BL550A | 1×PBS緩沖液(pH7.2- 7.4) | 500ml | Biosharp | 70 |
BL551A | 10×PBS緩沖液(pH7.2- 7.4) | 500ml | Biosharp | 90 |
BL552A | 1M DTT溶液 | 1ml | Biosharp | 60 |
基因克隆 | ||||
BL545A | IPTG溶液 50mg/ml | 5ml | Biosharp | 60 |
BL546A | X-gal溶液 20mg/ml | 5ml | Biosharp | 80 |
現(xiàn)貨