細菌基因組DNA提取試劑盒
簡要描述:貨 號:D0021名 稱:細菌基因組DNA提取試劑盒規(guī) 格:50T/200T價 格:360.00/1180.00
產品型號:
所屬分類:其他自產即用試劑
更新時間:2024-01-07
廠商性質:經銷商
細菌基因組DNA提取試劑盒
試劑盒組成 | 50T | 200T | 保存溫度 |
RNaseA(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ |
蛋白酶K(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ |
溶菌酶 | 0.5g | 2g | 2-8℃ |
裂解液 | 12ml | 50ml | RT |
TE緩沖液 | 10ml | 30ml | RT |
原理簡介
*的裂解緩沖液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物質,將DNA提取出來,得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游應用實驗。
注意事項
1.裂解液低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在熱水中溫浴幾分鐘幫助重新溶解,恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發(fā)、氧化、pH值變化,各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。
3. RNaseA經常使用可放2-8度保存,蛋白酶K請放-20度保存。
操作步驟
1.取100-300ul培養(yǎng)的細菌(如果細菌濃度很高,請減少細胞用量),12,000rpm,離心2分鐘,盡可能的吸凈上清。如果細菌為革蘭氏陽性菌,請用溶菌酶處理,處理方法:稱取100mg溶菌酶,加入1ml 雙蒸水,溶解后,分裝成100ul/支,凍存,用時取出一支,直接加入*步收集的菌液中,重懸菌液,37度處理半小時,離心,去上清。如果為陰性菌,可跳過此步。
2. 加入200ul裂解液,立即震蕩混勻,可選做步驟:如需要去除RNA,可以加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液,振蕩混勻,室溫放置5-10分鐘。
3.加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液,顛倒混勻,65℃放置10-30分鐘,期間顛倒3-5次,小心內心管蓋受熱開啟。
4.在上清中加入三倍體積無水乙醇,充分混勻。
5.12000rpm離心5min,棄上清,沉淀加入1ml 70%乙醇,輕輕混勻,再次12000rpm離心5min,棄上清,將離心管在離心機中再次離心30S左右,吸去底部少量液體。
7.室溫放置2min左右,等沉淀邊緣微微發(fā)白,加入50-100ulTE緩沖液溶解,如很難溶解,可55℃水浴5分鐘。
8.電泳或者其他方法檢測,進入下游實驗。