真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式)
簡要描述:貨 號:D0028名 稱:真菌基因組DNA提取試劑盒(非柱式)規(guī) 格:50T/200T價(jià) 格:360.00/1180.00
產(chǎn)品型號:
所屬分類:其他自產(chǎn)即用試劑
更新時(shí)間:2024-01-07
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
真菌基因組DNA提取試劑盒
試劑盒組成 | 50T | 200T | 保存溫度 |
RNaseA(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ |
蛋白酶K(10mg/ml) | 500ul | 2ml | -20℃ |
玻璃珠 | 5g | 20g | RT |
裂解液 | 15ml | 60ml | RT |
結(jié)合液 | 25ml | 100ml | RT |
玻璃奶 | 1ml | 4ml | RT |
TE緩沖液 | 10ml | 30ml | RT |
原理簡介
真菌是具有真核和細(xì)胞壁的異養(yǎng)生物。種屬很多,已報(bào)道的屬達(dá)1萬以上,種超過10萬個。真菌通常又分為三類,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。對于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠處理,而對于大型真菌,可直接用液液氮研磨。經(jīng)過前期處理的菌液,再經(jīng)過裂解液及蛋白酶處理后,玻璃奶吸附DNA,去掉其他雜質(zhì),,可得到高純度的基因組。提取純化后的DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng)
1.由于真菌種類萬千,對于一些特別難處理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振蕩,蛋白酶K處理,一般都可以得到一定量的基因組DNA,如電泳檢測很弱,一般PCR都會有較好結(jié)果。
2.如果DNA提取量很少,可加長玻璃珠處理時(shí)間,如果提取DNA PIAN段很短,成彌散條帶,可減少玻璃珠處理時(shí)間。
操作步驟
1.樣品的處理:
1)對于酵母菌,取1-2ml培養(yǎng)好的菌液,離心收集,棄上清。加入300ul 裂解液,加入10ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約5-10min。
2)霉素(孢子也可相同處理):取50-100mg菌絲,加300ul裂解液,用玻璃研磨器適當(dāng)研磨分散菌絲,加入10ulRNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約30min。
3)大型真菌(如蘑菇等):稱取50-100mg樣品,倒入適量的液氮,立即研磨重復(fù)3 次,使樣品研成粉末(如無液氮,可加300ul裂解液后用玻璃研磨器適當(dāng)研磨),加300ul裂解液,加入10ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振蕩器上振蕩,約5min。
2.加入10ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混勻,55℃水浴消化,15-30min。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。
3.12000轉(zhuǎn)離心2min。將上清轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中。如有沉淀,可再次離心。
4.在上清中加入三倍體積無水乙醇,充分混勻。
5.12000rpm離心5分鐘,去上清,核酸在沉淀中。
6.沉淀中加入500ul結(jié)合液,55℃水浴1-2分鐘,核酸沉淀可溶解。
6.玻璃奶搖勻。加入50ul搖勻的玻璃奶,混勻,室溫放置2分鐘,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,去上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振蕩混勻,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,去上清,70%乙醇重復(fù)洗一次,再用無水乙醇洗一次。去上清,再次離心2分鐘,用小吸頭吸去上清。
7.室溫放置10分鐘(如果玻璃奶加量,請適當(dāng)延長放置時(shí)間,此步為去除殘余酒精,以免影響下游實(shí)驗(yàn)),加入50-100ul TE緩沖液混勻溶解,55℃水浴5分鐘。離心,取上清為所提基因組。
8.電泳或者其他方法檢測,進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)。
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