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質(zhì)粒DNA提取試劑盒

質(zhì)粒DNA提取試劑盒

簡要描述:貨  號:D0001
名  稱:質(zhì)粒DNA提取試劑盒
規(guī)  格:100T/500T
價  格:120/480

產(chǎn)品型號:

所屬分類:其他自產(chǎn)即用試劑

更新時間:2024-01-07

廠商性質(zhì):經(jīng)銷商

詳情介紹

質(zhì)粒DNA提取試劑盒

試劑盒組成

100T

500T

保存溫度

RNaseA(10mg/ml)

400ul

2ml

-20℃

溶液Ⅰ

15ml

75ml

RT

溶液Ⅱ

15ml

75ml

RT

溶液Ⅲ

15ml

75ml

RT

玻璃奶

5ml

25ml

RT

TE緩沖液

15ml

75ml

RT

 

質(zhì)粒DNA提取試劑盒原理簡介
本試劑盒是在經(jīng)典的質(zhì)粒提取方法上改進而來,利用玻璃奶吸附質(zhì)粒,代替有毒的酚氯Fang抽提,得到的DNA可用于常規(guī)下游應(yīng)用實驗,但可能并不適用于轉(zhuǎn)染(轉(zhuǎn)染請選去內(nèi)毒素質(zhì)量提取試劑盒。本試劑盒(以100T為例)可以用100小次或者5大次提取。

注意事項
1.溶液Ⅱ低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以37度水浴幾分鐘即可恢復(fù)澄清透明。用完請及時蓋緊蓋子。
2.溶液Ⅰ中加入RNaseA后請放2-8度保存,如果長久不用(如一個月),可-20度凍存,或者按照比較分次加入。
3.可根據(jù)實驗情況中量或者大量提取,加入的試劑等比放大。

操作步驟(以小量提取為例,中提或者大提可等比例加入)
在溶液Ⅰ中加入RNaseA,混勻,2-8度保存。
1.取過ye菌1-5毫升,5000g離心1分鐘收集細菌沉淀,棄上清(可重復(fù)多次收集于一管中,收集量可考慮菌液濃度與質(zhì)??截悢?shù)),如為陽性細菌,可加入100mg/ml的溶菌酶懸浮菌液,37度處理30分鐘,離心,收集沉淀。
2.在收集的菌液中,加入150ul溶液I,重懸細菌沉淀。確保沉淀*散開,無可見細菌團塊(可vortex 5-10秒或更長時間)。室溫放置2-3分鐘。
3.每管加入150ul溶液Ⅱ(如有沉淀,可37度水浴),輕輕顛倒離心管4-6次,使細菌*裂解,溶液透明。放置2-3分鐘,不過超過5分鐘。但也不要混勻后立刻加入溶液Ⅲ。
4.放置2-3分鐘后,每管加入150ul溶液III,隨即顛倒離心管4-6次混勻,可見白色絮狀物產(chǎn)生。
5.zui高速(13,000rpm左右)室溫離心5分鐘。
6.將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,如有沉淀,可再次離心。
7.玻璃奶搖勻。
8.在第6步的上清中加入50ul混勻的玻璃奶,混勻。室溫放置5分鐘,期間顛倒2次。
9.10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,倒掉上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振蕩混勻,10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘,去上清,70%乙醇重復(fù)洗一次,再用無水乙醇洗一次。去上清,再次離心2分鐘,用小吸頭吸去上清。
7.室溫放置10分鐘(如果為大提,請延長放置時間到30分鐘,此步為去除殘余酒精,以免影響下游實驗),加入50-100ulTE緩沖液混勻溶解,55℃水浴5分鐘。離心,取上清轉(zhuǎn)移到一新的離心管中。此為所提質(zhì)粒。
8.電泳或者其他方法檢測,進入下游實驗。



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