去內(nèi)毒素質粒DNA提取試劑盒
簡要描述:貨 號:D0003名 稱:去內(nèi)毒素質粒DAN提取試劑盒規(guī) 格:50T/200T價 格:180/480
產(chǎn)品型號:
所屬分類:其他自產(chǎn)即用試劑
更新時間:2024-01-07
廠商性質:經(jīng)銷商
去內(nèi)毒素質粒DAN提取試劑盒
試劑盒組成 | 50T | 200T | 保存溫度 |
RNaseA(10mg/ml) | 400ul | 2ml | -20℃ |
溶液Ⅰ | 10ml | 40ml | RT |
溶液Ⅱ | 10ml | 40ml | RT |
溶液Ⅲ | 10ml | 40ml | RT |
內(nèi)毒素清除劑 | 25ml | 100 ml | 2-8℃ |
結合液 | 30 ml | 120 ml | RT |
玻璃奶 | 1ml | 4ml | RT |
TE緩沖液 | 10ml | 30ml | RT |
原理簡介
本試劑盒在常規(guī)質粒提取試劑盒的基礎上改進而來,增加內(nèi)毒素清步驟,提取的質??捎糜谝恍┮蟾叩膶嶒?,如轉染。
本試劑盒(以200T為例)可以用200小次或者*次提取。
注意事項
1.溶液Ⅱ低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以37度水浴幾分鐘即可恢復澄清透明。用完請及時蓋緊蓋子。
2.溶液Ⅰ中加入RNase 后請放2-8度保存,如果長久不用(如一個月),可-20度凍存,或者按照比較分次加入。
3.可根據(jù)實驗情況中量或者大量提取,加入的試劑等比放大。
4.內(nèi)毒素清除劑在常溫下出現(xiàn)面混濁現(xiàn)象,為正常,在2-8℃放置一段時間混濁會消失。
5.本試劑盒在去除內(nèi)毒素的過程中會損失少量質粒,因而相對于常規(guī)提取,本試劑盒得率偏低。
操作步驟(以小量提取為例,中提或者大提可等比例加入)
在溶液Ⅰ中加入RNaseA,混勻,2-8度保存。
1.取過ye菌1-5毫升,5000g離心1分鐘收集細菌沉淀,棄上清(可重復多次收集于一管中,收集量可考慮菌液濃度與質??截悢?shù)),如為陽性細菌,可加入100mg/ml的溶菌酶懸浮菌液,37度處理30分鐘,離心,收集沉淀。
2.在收集的菌液中,加入200ul溶液I,重懸細菌沉淀。確保沉淀*散開,無可見細菌團塊(可vortex 5-10秒或更長時間)。室溫放置2-3分鐘。
3.每管加入200ul溶液Ⅱ(如有沉淀,可37度水浴),輕輕顛倒離心管4-6次,使細菌*裂解,溶液透明。放置2-3分鐘,不過超過5分鐘。但也不要混勻后立刻加入溶液Ⅲ。
4.放置2-3分鐘后,每管加入200ul溶液III,隨即顛倒離心管4-6次混勻,可見白色絮狀物產(chǎn)生。
5.zui高速(13,000rpm左右)室溫離心5分鐘。
6.將上清轉移到新的離心管中,如有沉淀,可再次離心。
7.加入上清1/5體積冰預冷的內(nèi)毒素清除劑,振蕩混勻,溶液變渾濁,冰浴2min至溶液變清亮。
8.37℃水浴2min,不時振蕩,溶液又變渾濁。12000rpm室溫離心2min,溶液應分為兩相,上層水相含質粒DNA,下層油狀相含內(nèi)毒素。
9.將含質粒DNA的上層水相轉移至新管,棄下層油狀相,注意不要吸入油狀相。重復抽提三次,即重復步驟7-9三次。
10.在得到的上清中加入等體積的結合液,再加入等體積的無水乙醇,混勻(上清:結合液:無水乙醇=1:1:1)
11.玻璃奶搖勻。取20ul混勻的玻璃奶加入上面的混合液中,混勻。室溫放置5分鐘,期間顛倒2次。
12.10000轉/分鐘離心1分鐘,倒掉上清;沉淀加入1ml 70%乙醇,振蕩混勻,10000轉/分鐘離心1分鐘,去上清,70%乙醇重復洗一次,再用無水乙醇洗一次。去上清,再次離心2分鐘,用小吸頭吸去上清。
13.室溫放置10分鐘(如果為大提,請延長放置時間到30分鐘,此步為去除殘余酒精,以免影響下游實驗),加入30-50ulTE緩沖液混勻溶解,55℃水浴5分鐘。離心,取上清轉移到一新的離心管中。此為所提質粒。
14.電泳或者其他方法檢測,進入下游實驗。
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