B27無血清培養(yǎng)基專門用來在無血清條件下培養(yǎng)特殊類型的細胞或進行特殊應(yīng)用。
B27無血清培養(yǎng)基的使用展現(xiàn)了一種重要的培養(yǎng)方法:允許細胞培養(yǎng)
在一套限定條件下進行,盡可能避免受到干擾參數(shù)的影響。
細胞適應(yīng)B27無血清培養(yǎng)基的方法
1.直接適應(yīng)——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到B27無血清培養(yǎng)基中。
一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)B27無血清培養(yǎng)基。對于直接適應(yīng),接種細胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當(dāng)細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時,傳代培養(yǎng)細胞。當(dāng)細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時,細胞*適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天,當(dāng)細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
2.連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到B27無血清培養(yǎng)基中,與直接適應(yīng)相比較,連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩毎訙睾鸵恍?/div>
(1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到80%有血清培養(yǎng)基:30%sfm混合培養(yǎng)基中,傳代培養(yǎng)。
(2)當(dāng)細胞密度>5×105細胞/ml時,以2×105到3×105細胞/ml細胞密度,在有血清培養(yǎng)基:sfm為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(3)以2×106到3×106細胞/ml細胞密度,25%有血清培養(yǎng)基和75%sfm中傳代培養(yǎng)。
(4)當(dāng)細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml(接種后4到6天),在100%sfm培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
(5)每隔3到5天,當(dāng)細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應(yīng)了B27無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。